Mô hình hóa quá trình chiết Polyhenol từ vỏ vải - Lại Thị Ngọc Hà

Nội dung text: Mô hình hóa quá trình chiết Polyhenol từ vỏ vải - Lại Thị Ngọc Hà

1. Tạp chí Khoa học và Phát triển 2010: Tập 8, số 6: 994 - 1003 TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI M¤ H×NH HãA QU¸ TR×NH CHIÕT POLYPHENOL Tõ Vá V¶I Modelling the Extraction of Phenolics from Litchi Fruit Pericarp Lại Thị Ngọc Hà1, Nguyễn Thị Thu Hương, Phan Thị Hằng2 1Khoa Công nghệ thực phẩm, Trường Đại học Nông nghiệp Hà Nội 2Lớp Bảo quản chế biến A K51, Trường Đại học Nông nghiệp Hà Nội Địa chỉ email tác giả liên lạc: lnha1999@yahoo.com TÓM TẮT Hàm lượng polyphenol tổng số, anthocyanin tổng số và khả năng kháng oxi hóa của vỏ vải được xác định. Kết quả cho thấy hàm lượng polyphenol trong vỏ vải cao (96,25 mgGAE/g CK), do vậy có thể là nguồn polyphenol tiềm năng ứng dụng được trong công nghiệp thực phẩm. Kết quả cho thấy hàm lượng polyphenol trong vỏ vải cao (96,25 mgGAE/g CK), do vậy có thể là nguồn polyphenol tiềm năng ứng dụng được trong công nghiệp thực phẩm. Ảnh hưởng của một số yếu tố công nghệ như: nồng độ ethanol, nhiệt độ, pH và thời gian đến hiệu suất thu hồi polyphenol được nghiên cứu. Mô S hình mô tả quá trình tách chiết polyphenol từ vỏ vải được xây dựng Y= 62745,17 + 3946,87X 1 + S S S S S S S S 6643,00X 2 – 9949,96X 3 – 1392,63X 1X 2 + 2718,14X 1X 3 + 9880,41X 2X 3. Từ khóa: Chiết, khả năng kháng oxi hóa, mô hình, nhiệt độ, pH, polyphenol, vỏ vải. SUMMARY The total phenolics, total monomeric anthocyanin and the antioxidant capacity of the litchi pericarp were determined. The results showed that the litchi pericarp is rich in polyphenol (96.25 mgGAE/g DW), and it is an important source of phenolic which could be used in food processing technologies. Several influencing factors on the phenolic extraction from litchi fruit pericarp were studied such as ethanol concentration, temperature,pH and time. The simulation model of the S S S extraction process was determined: Y= 62,745.17 + 3,946.87X 1 + 6,643.00X 2 – 9,949.96X 3 – S S S S S S 1,392.63X 1X 2 + 2,718.14X 1X 3 + 9,880.41X 2X 3 Key words: Antioxidant capacity, extraction, litchi pericarp, model, pH, polyphenol, temperature. 1. §ÆT VÊN §Ò ph¸ hñy c¸c ®¹i ph©n tö sinh häc (ADN, Stress oxi hãa ®Æc tr−ng bëi sù mÊt c©n protein, lipid) vμ g©y bÖnh cho c¬ thÓ. b»ng gi÷a s¶n xuÊt c¸c gèc tù do vμ ho¹t Trong sè c¸c chÊt chèng oxi hãa tù nhiªn ®éng cña c¸c chÊt chèng oxi hãa trong c¬ thÓ cã trong rau qu¶, polyphenol lμ nhãm chÊt ®−îc coi lμ nguyªn nh©n cña rÊt nhiÒu bÖnh rÊt ®−îc quan t©m bëi lÏ polyphenol thÓ hiÖn trong ®ã cã ung th−, tim m¹ch, suy gi¶m hÖ nh÷ng ®Æc tÝnh sinh häc quý ®Æc biÖt lμ kh¶ thÇn kinh (Alzheimer, Parkinson) vμ l·o hãa n¨ng chèng oxi hãa, chèng viªm, chèng dÞ sím (Pincemail vμ Defraigne, 2004; Edeas, øng vμ kh¶ n¨ng kh¸ng khuÈn (Tapiero vμ cs., 2006). KÕt qu¶ nhiÒu nghiªn cøu cho thÊy cã 2002; Alberto vμ cs., 2006). C¸c polyphenol cã mét mèi liªn hÖ nghÞch gi÷a kh¶ n¨ng xuÊt tÝnh khö gièng vitamine C, khö c¸c gèc tù do hiÖn c¸c c¨n bÖnh trªn vμ chÕ ®é ¨n giμu rau vμ v« ho¹t chóng. Ngoμi ra, polyphenol lμm qu¶. Gi¶i thÝch hîp lý cho mèi liªn hÖ nghÞch t¨ng hiÖu qu¶ chèng oxi hãa cña nhiÒu chÊt nμy lμ sù cã mÆt cña c¸c chÊt chèng oxi hãa chèng oxi hãa tù nhiªn kh¸c nh− vitamine tù nhiªn cã trong rau qu¶. C¸c chÊt chèng C, E vμ c¸c carotenoid. NhiÒu kÕt qu¶ thö oxi hãa tù nhiªn trong rau qu¶ sÏ v« ho¹t c¸c nghiÖm cho thÊy chÕ ®é ¨n giμu polyphenol gèc tù do khiÕn chóng kh«ng cßn kh¶ n¨ng (qu¶, rau, ngò cèc nguyªn d¹ng, r−îu vang 994
2. Mô hình hóa quá trình chiết polyphenol từ vỏ vải ®á, trμ) cho phÐp h¹n chÕ sù xuÊt hiÖn nhau sÏ chÞu ¶nh h−ëng kh¸c nhau cña c¸c stress oxi hãa vμ c¸c bÖnh liªn quan (Hung yÕu tè kÓ trªn vμ cã ®iÒu kiÖn tèi −u ®Ó chiÕt vμ cs., 2004; Haliwell, 1994). Polyphenol dåi polyphenol. Môc ®Ých cña nghiªn cøu nμy lμ dμo trong l¸ chÌ gióp ng−êi d©n ch©u ¸ trÎ dïng phÇn mÒm to¸n häc m« t¶ ¶nh h−ëng l©u, kháe vμ sèng thä. Polyphenol trong cña mét sè yÕu tè c«ng nghÖ ®Õn hiÖu qu¶ khoai t©y mμu tÝm, ®á trång trªn c¸c cao chiÕt polyphenol tõ vá v¶i. nguyªn Nam Mü ®· gióp ng−êi d©n Peru, Bolivia cã søc kháe tèt, tr¸nh ®−îc nhiÒu 2. VËT LIÖU Vμ PH¦¥NG PH¸P lo¹i bÖnh nguy hiÓm. NGHI£N CøU ViÖt Nam lμ n−íc nhiÖt ®íi giã mïa, hoa tr¸i cã quanh n¨m. RÊt nhiÒu lo¹i c©y ¨n 2.1. VËt liÖu vμ hãa chÊt qu¶, c©y rau, c©y thuèc cã hμm l−îng Vá v¶i ®−îc thu t¹i Tr−êng §¹i häc polyphenol cao høa hÑn lμ ®èi t−îng nghiªn N«ng nghiÖp Hμ Néi th¸ng 6 n¨m 2009. Vá cøu x¸c ®Þnh ho¹t tÝnh sinh häc, nghiªn cøu cßn t−¬i, cã mμu ®á t−¬i, ®−îc röa s¹ch, ®Ó chÕ biÕn c¸c s¶n phÈm cã gi¸ trÞ kinh tÕ, sinh r¸o n−íc, ®«ng kh« ë nhiÖt ®é -500C b»ng häc cao nh− c©y æi, c©y v¶i, c©y lùu, c©y t¸o m¸y ®«ng kh« trong hai ngμy. Sau ®ã, vá kh« mÌo, c¸c lo¹i chÌ ®¾ng, c©y rau diÕp c¸ ®−îc nghiÒn nhá vμ b¶o qu¶n ë nhiÖt ®é - Trong sè c¸c lo¹i rau qu¶ giμu polyphenol, 230C d−íi nit¬ khÝ. qu¶ v¶i cã hμm l−îng polyphenol cao (cao Acid gallic, DPPH (2,2 - diphenyl - 1 - h¬n 15% so víi nho) trong ®ã phÇn vá qu¶ picrylhydrazyl), thuèc thö Folin – Ciocalteu, chøa hμm l−îng polyphenol kh¸ lín (80-120 Trolox (6-hydroxy-2, 5, 7, 8-tetramethyl-2- mg GAE/g CK, Ruenroengklin vμ cs., 2008). carbocylic acid) cña Sigma (§øc). C¸c dung DÞch chiÕt polyphenol tõ vá v¶i cã t¸c dông m«i ethanol, methanol, aceton; hãa chÊt k×m h·m sù tæng hîp ADN cña tÕ bμo ung Na2CO3, KCl, CH3COONa.3H2O, acid acetic, th−, do ®ã k×m h·m sù ph¸t triÓn cña khèi u acid chlohydric cña Trung Quèc. (Wang vμ cs., 2006). PhÇn vá chiÕm 15% khèi l−îng qu¶ v¶i t−¬i (Ruenroengklin vμ 2.2. C¸c thÝ nghiÖm kh¶o s¸t cs., 2008) vμ lμ phÇn phÕ phÈm cña c«ng Tr−íc khi tiÕn hμnh thÝ nghiÖm m« h×nh nghÖ chÕ biÕn v¶i. §©y høa hÑn lμ nguån hãa, mét sè thÝ nghiÖm kh¶o s¸t ®−îc thùc nguyªn liÖu dåi dμo cho s¶n xuÊt dÞch giμu hiÖn ®Ó x¸c ®Þnh s¬ bé kho¶ng ¶nh h−ëng polyphenol øng dông trong c«ng nghiÖp thùc cña c¸c yÕu tè ®Õn hiÖu qu¶ chiÕt polyphenol phÈm vμ d−îc phÈm. tõ vá v¶i. S¶n xuÊt dÞch giμu polyphenol tõ thùc 2.2.1. ThÝ nghiÖm kh¶o s¸t 1: ¶nh h−ëng cña vËt lu«n b¾t ®Çu b»ng c«ng ®o¹n chiÕt lo¹i dung m«i polyphenol vμ ph−¬ng ph¸p chiÕt b»ng dung 0,2 g vá v¶i d¹ng bét + 20 ml dung m«i m«i lμ ph−¬ng ph¸p th−êng ®−îc sö dông nhÊt. HiÖu qu¶ chiÕt polyphenol theo ph−¬ng nghiªn cøu, thêi gian l¾c 3 giê víi vËn tèc l¾c 0 ph¸p nμy phô thuéc rÊt nhiÒu yÕu tè: lo¹i 200 vßng/phót, nhiÖt ®é 30 C, li t©m trong 30 dung m«i sö dông, nång ®é dung m«i, nhiÖt phót víi 6000 v/ph. CÊt ®uæi dung m«i vμ ®é chiÕt, thêi gian chiÕt, pH cña dung dÞch hßa tan trë l¹i lªn 10 ml b»ng n−íc cÊt thu chiÕt (Chirinos vμ cs., 2007; Silva vμ cs., ®−îc dÞch chiÕt polyphenol. X¸c ®Þnh hμm 2007; Todaro vμ cs., 2009; Pompeu vμ cs., l−îng polyphenol tæng sè cña dÞch chiÕt. 2009). Kh«ng cã quy tr×nh t¸ch chiÕt chung 2.2.2. ThÝ nghiÖm kh¶o s¸t 2: ¶nh h−ëng cho tÊt c¶ c¸c lo¹i thùc vËt. Mçi lo¹i nguyªn nhiÖt ®é liÖu thùc vËt kh¸c nhau víi ®Æc ®iÓm cÊu t¹o 0,2 g vá v¶i d¹ng bét + 20 ml dung m«i kh¸c nhau vμ thμnh phÇn polyphenol kh¸c rót ra tõ thÝ nghiÖm kh¶o s¸t 1, thêi gian 995
3. Lại Thị Ngọc Hà, Nguyễn Thị Thu Hương, Phan Thị Hằng l¾c 3 giê víi vËn tèc l¾c 200 vßng/phót, li Method 2005.02). Cho 0,2 g vá v¶i vμo 10 ml t©m trong 30 phót víi 6000 vßng/phót. CÊt methanol 80% chøa HCl nång ®é 0,1%. Hçn ®uæi dung m«i vμ hßa tan trë l¹i lªn 10 ml hîp ®−îc trén ®Òu vμ chiÕt ë 40C trong 24 b»ng n−íc cÊt thu ®−îc dÞch chiÕt giê. Hçn hîp sau ®ã ®−îc ly t©m, dÞch trong polyphenol. X¸c ®Þnh hμm l−îng polyphenol thu ®−îc lμ dÞch chiÕt anthocyanin. DÞch tæng sè cña dÞch chiÕt. chiÕt anthocyanin ®−îc hßa tan 10 lÇn trong c¸c dung dÞch ®Öm KCl pH 1 vμ CH COONa 2.2.3. ThÝ nghiÖm kh¶o s¸t 3: ¶nh h−ëng 3 pH 4,5. §o ®é hÊp thô cña c¸c dung dÞch nμy thêi gian t¹i 520 vμ 700 nm. Hμm l−îng anthocyanin 0,2 g vá v¶i d¹ng bét + 20 ml dung m«i ®−îc tÝnh theo c«ng thøc sau: rót ra tõ thÝ nghiÖm kh¶o s¸t 1, vËn tèc l¾c 200 vßng/phót, nhiÖt ®é 300C, li t©m trong 30 TAC (mg/g) = A*MW*f*V/m /ε /1 phót víi 6000 vßng/phót. CÊt ®uæi dung m«i Trong ®ã: vμ hßa tan trë l¹i lªn 10 ml b»ng n−íc cÊt thu ®−îc dÞch chiÕt polyphenol. X¸c ®Þnh A = (A520 – A700)pH1 - (A520 – A700)pH4.5 hμm l−îng polyphenol tæng sè cña dÞch chiÕt. f: hÖ sè pha lo·ng 1: chiÒu dμy cuvette (cm) 2.3. ThÝ nghiÖm m« h×nh hãa vμ tèi −u hãa V: thÓ tÝch dÞch chiÕt (l) ThÝ nghiÖm m« h×nh hãa ®−îc tiÕn hμnh m: khèi l−îng vá v¶i (g) víi 3 yÕu tè ¶nh h−ëng sau: X - Nång ®é 1 MW = 449,2 g/mol vμ ε = 26.900 l/mol/cm ethanol (% v/v); X - NhiÖt ®é xö lý (oC); X - 2 3 lμ khèi l−îng ph©n tö vμ ®é hÊp thô ph©n tö pH dung dÞch chiÕt. Kho¶ng biÕn ®æi cña c¸c yÕu tè ¶nh h−ëng ®−îc rót ra tõ c¸c thÝ cña cyanidin-3-glucoside (anthocyanin phæ nghiÖm kh¶o s¸t vμ dùa trªn c¸c tμi liÖu biÕn trong tù nhiªn). tham kh¶o. Hμm môc tiªu Y lμ hμm l−îng Hμm l−îng anthocyanin ®−îc biÓu diÔn polyphenol tæng sè thu ®−îc tõ 1g chÊt kh« b»ng mg ®−¬ng l−îng cyanidin-3-glucoside vá v¶i (μg GAE/g CK). trong 1 g chÊt kh« vá v¶i (mg CGE/g CK- mg D¹ng cña m« h×nh: Cyanidin-3-Glucoside Equivalent/g chÊt kh«). Y = b0 + b1X1 + b2X2 + b3X3 + b12X1X2 + 2.4.3. Kh¶ n¨ng kh¸ng oxi hãa b X X + b X X 13 1 3 23 2 3 Kh¶ n¨ng kh¸ng oxi hãa ®−îc x¸c ®Þnh 2.4. C¸c ph−¬ng ph¸p ph©n tÝch hãa sinh b»ng ph−¬ng ph¸p 1,1 - diphenyl - 2 - picryl 2.4.1. Hμm l−îng polyphenol tæng sè hydrazyl radical (DPPH) (Tabart vμ cs., Hμm l−îng polyphenol tæng sè ®−îc x¸c 2009). 100 μl mÉu ®−îc ph¶n øng víi 2900 μl ®Þnh b»ng ph−¬ng ph¸p Folin-Ciocalteu DPPH 0,2 mM pha trong methanol ë 250C (Singleton vμ Rossi, 1965). §−a 500 μl dÞch trong 20 phót. §o ®é hÊp thô cña hçn hîp t¹i chiÕt vμo èng nghiÖm, thªm 250 μl thuèc thö 517 nm. MÉu control ®−îc tiÕn hμnh t−¬ng tù Folin – Ciocalteu 1N, l¾c ®Òu sau ®ã thªm nh−ng thay 100 μl dÞch chiÕt b»ng n−íc cÊt. 1250 μl Na2CO3 7,5%. Sau 30 phót, ®o ®é % k×m h·m = (Acontrol - AmÉu)/ hÊp thô cña hçn hîp t¹i 755 nm. Gallic acid Acontrol*100. ®−îc dïng lμm chÊt chuÈn (y = 0,0299x + Trong ®ã: Acontrol vμ AmÉu lμ ®é hÊp thô 0,0095; R2 = 0,9989). Hμm l−îng polyphenol t¹i 517 nm cña mÉu control vμ cña dÞch chiÕt. ®−îc biÓu diÔn theo ®−¬ng l−îng acid gallic Trolox – mét dÉn xuÊt cña vitamine E trong 1 g chÊt kh« vá v¶i (μg GAE/g CK – μg ®−îc dïng lμm chÊt chuÈn (y = 0,0806x – Gallic Acid Equivalent/g chÊt kh«). 0,2453; R2 = 0,9997). Kh¶ n¨ng kh¸ng oxi 2.4.2. Hμm l−îng anthocyanin tæng sè hãa ®−îc biÓu diÔn b»ng mol ®−¬ng l−îng Hμm l−îng anthocyanin tæng sè ®−îc Trolox trªn 1 gam chÊt kh« vá v¶i (mol TE/g x¸c ®Þnh b»ng ph−¬ng ph¸p pH vi sai (AOAC CK - mol Trolox Equivalent / g chÊt kh«). 996
4. Mô hình hóa quá trình chiết polyphenol từ vỏ vải M« h×nh hãa b»ng phÇn mÒm Nemrowd. polyphenol cao h¬n b· t¸o (phÕ phÈm cña C¸c thÝ nghiÖm ®−îc lÆp l¹i 3 lÇn. KÕt c«ng nghiÖp s¶n xuÊt n−íc Ðp t¸o, 7,16 mg qu¶ ®−îc xö lý b»ng Excel 2003 vμ SAS 9.0. GAE/g) (Sudha vμ cs., 2007), cao h¬n bét b· nho (phÕ phÈm cña c«ng nghiÖp s¶n xuÊt 3. KÕT QU¶ Vμ TH¶O LUËN r−îu vang, 2,78 - 5,33 mg/g CK) (Chun Yi vμ cs., 2009) thÊp h¬n so víi vá qu¶ lùu (phÕ 3.1. Mét sè chØ tiªu cña vá v¶i nguyªn phÈm cña chÕ biÕn lùu - 140 mg GAE/g CK) liÖu vμ vá v¶i ®«ng kh« (Shabtay vμ cs., 2008). So víi c¸c lo¹i l¸ c©y Bét vá v¶i ®−îc chiÕt b»ng triple rõng Amazon hiÖn ®ang ®−îc quan t©m nh− extraction (chiÕt lÇn l−ît b»ng acetone, hçn nguån polyphenol dåi dμo cã hμm l−îng hîp methanol : n−íc : acid acetic, hçn hîp polyphenol biÕn ®æi trong kho¶ng 44,2 - 63,0 ethanol : n−íc : acid acetic). DÞch chiÕt ®−îc mg GAE/g CK (Souza vμ cs., 2008), vá v¶i cã cÊt ®uæi dung m«i, lªn thÓ tÝch 10 ml vμ ®−îc hμm l−îng polyphenol cao h¬n. C¸c kÕt qu¶ dïng ®Ó x¸c ®Þnh hμm l−îng polyphenol tæng nμy cho thÊy, vá v¶i lμ nguån polyphenol sè vμ kh¶ n¨ng kh¸ng oxi hãa. thùc vËt dåi dμo. ViÖc tËn dông vá v¶i - mét Mét sè chØ tiªu cô thÓ cña vá v¶i t−¬i vμ lo¹i phÕ phÈm cña c«ng nghiÖp thùc phÈm vá v¶i nguyªn liÖu ®−îc x¸c ®Þnh: gãp phÇn t¨ng gi¸ trÞ kinh tÕ cña c©y v¶i, t¹o - Tû lÖ vá qu¶: 13,77% khèi l−îng qu¶ t−¬i. thªm s¶n phÈm cã nguån gèc tù nhiªn øng - Hμm l−îng chÊt kh« tæng sè cña vá dông ®−îc trong c«ng nghiÖp thùc phÈm vμ t−¬i: 27,00%. c«ng nghiÖp d−îc nh− chÊt chèng oxi hãa. - Hμm l−îng chÊt kh« tæng sè cña mÉu ®«ng kh«: 93,28%. 3.2. Kh¶o s¸t s¬ bé ¶nh h−ëng cña mét sè - MÉu ®«ng kh« cã mμu hång tÝa vμ mïi yÕu tè c«ng nghÖ ®Õn hiÖu qu¶ chiÕt ®Æc tr−ng cña vá v¶i. polyphenol tõ vá v¶i - Hμm l−îng polyphenol tæng sè cña vá 3.2.1. ¶nh h−ëng cña dung m«i v¶i: 96,25 mg GAE/g CK hay 25,99 mg GAE/g vá v¶i t−¬i. HiÖu qu¶ chiÕt polyphenol tõ nguyªn - Kh¶ n¨ng kh¸ng cña oxi hãa cña vá v¶i liÖu thùc vËt phô thuéc vμo lo¹i dung m«i sö 894,26 mol TE/g CK. dông ®Æc biÖt ®é ph©n cùc cña dung m«i. - Hμm l−îng anthocyanin cña vá v¶i: ViÖc sö dông duy nhÊt dung m«i cã ®é ph©n 0,61 mg cyanidin-3-glucosid/g CK hay 16,47 cùc cao nh− n−íc hay c¸c dung m«i h÷u c¬ mg cyanidin-3-glucosid /100g vá v¶i t−¬i. kÐm ph©n cùc nh− hexan hay chloroforme Hμm l−îng polyphenol còng nh− kh«ng cho hiÖu qu¶ thu polyphenol cao v× anthocyanin x¸c ®Þnh ®−îc cña vá v¶i thu h¸i thμnh phÇn polyphenol thùc vËt rÊt ®a d¹ng t¹i Tr−êng §¹i häc N«ng nghiÖp lÇn l−ît lμ (ph©n cùc vμ kh«ng ph©n cùc). Kh«ng cã lo¹i 96,25 mg GAE/g CK vμ 0,61 mg CGE/g CK. dung m«i hay hÖ dung m«i chuÈn nμo dïng KÕt qu¶ nμy gÇn víi c¸c kÕt qu¶ ®−îc c«ng bè chung ®Ó t¸ch polyphenol cña thùc vËt. tr−íc ®©y. Ruenroengklin vμ cs. (2008) x¸c Methanol vμ hçn hîp methanol th−êng ®−îc ®Þnh hμm l−îng polyphenol thu ®−îc tõ vá v¶i sö dông trong c¸c thÝ nghiÖm chiÕt lμ 80-120 mg GAE/g CK tïy thuéc vμo ®iÒu polyphenol (Silva vμ cs., 2007; Souza vμ cs., kiÖn t¸ch chiÕt. Theo Hu vμ cs. (2010), tæng l−îng acid phenolic, flavanoid, proanthocyanin 2008). C¸c dung m«i kh¸c nh− ethanol, cña vá v¶i lμ 41 - 106 mg/g CK. Hμm l−îng acetone, ethylacetate còng ®−îc sö dông ®Ó anthocyanin cña vá v¶i ®−îc Duan vμ cs. chiÕt polyphenol (Chirinos vμ cs., 2007). (2007) x¸c ®Þnh lμ 18,6 mg/100 g chÊt t−¬i. TiÕn hμnh chiÕt polyphenol tõ vá v¶i So víi c¸c phÕ phÈm kh¸c cña ngμnh b»ng methanol, ethanol, hçn hîp methanol : c«ng nghiÖp thùc phÈm, vá v¶i cã hμm l−îng n−íc, hçn hîp ethanol : n−íc (B¶ng 1). 997
5. Lại Thị Ngọc Hà, Nguyễn Thị Thu Hương, Phan Thị Hằng B¶ng 1. ¶nh h−ëng cña lo¹i dung m«i ®Õn hiÖu suÊt chiÕt polyphenol tõ vá v¶i Loại dung môi Polyphenol tổng số (mgGAE/g CK) Hiệu suất thu hồi polyphenol (%) Methanol 41,93 a 43,56 Ethanol 19,76 d 20,53 Methanol/nước, 70/30, v/v 28,94 c 30,07 Ethanol/nước, 70/30, v/v 38,55 b 40,05 Các số với các chữ khác nhau thì khác nhau ở mức ý nghĩa 0,05. *: Hiệu suất thu hồi = Polyphenol tổng số thu được (mgGAE/g CK)/Polyphenol tổng số của vỏ vải (mgGAE/g CK)*100 B¶ng 2. ¶nh h−ëng cña nhiÖt ®é ®Õn hiÖu suÊt chiÕt polyphenol tõ vá v¶i Nhiệt độ (°C) Polyphenol tổng số (mg GAE/g CK) Hiệu suất thu hồi polyphenol (%) 40 44,74b 46,48 50 60,23a 62,58 60 44,62b 46,36 Các số với các chữ khác nhau thì khác nhau ở mức ý nghĩa 0,05. *: Hiệu suất thu hồi = Polyphenol tổng số thu được (mgGAE/g CK)/Polyphenol tổng số của vỏ vải (mgGAE/g CK)*100 KÕt qu¶ xö lý b»ng phÇn mÒm SAS9.0 TiÕn hμnh chiÕt polyphenol tõ vá v¶i ë cho ta thÊy c¸c lo¹i dung m«i kh¸c nhau th× c¸c nhiÖt ®é kh¸c nhau, kÕt qu¶ ®−îc giíi cho kh¶ n¨ng trÝch ly polyphenol kh¸c nhau thiÖu ë b¶ng 2. ë møc ý nghÜa P = 0,05. Trong ®ã, methanol KÕt qu¶ xö lý thèng kª b»ng phÇn mÒm lμ lo¹i dung m«i cho kh¶ n¨ng chiÕt lín SAS9.0 cho thÊy ë møc ý nghÜa P = 0,05, nhÊt, cho hμm l−îng polyphenol tæng sè lμ nhiÖt ®é ¶nh h−ëng ®Õn kh¶ n¨ng t¸ch chiÕt 41,93 mgGAE/gCK, hiÖu suÊt thu håi polyphenol tõ vá v¶i. NhiÖt ®é cho hμm 43,56%, ethanol cho kh¶ n¨ng chiÕt thÊp l−îng polyphenol lín nhÊt ë 500C lμ 60,23 nhÊt. ViÖc thªm n−íc vμo ethanol lμm t¨ng mgGAE/gCK víi hiÖu suÊt thu håi lμ hiÖu qu¶ chiÕt polyphenol tõ vá v¶i. N−íc 62,58%. Tõ 400C khi nhiÖt ®é t¨ng tõ 40 ®Õn thªm vμo ethanol cho phÐp t¨ng hiÖu qu¶ 500C, kh¶ n¨ng chiÕt polyphenol t¨ng do chiÕt c¸c hîp chÊt phenol ë d¹ng glycoside nhiÖt ®é cao thóc ®Èy sù x©m nhËp cña dung vèn dÔ hßa tan trong n−íc. XÐt vÒ mÆt hiÖu m«i vμo nguyªn liÖu vμ chiÕt rót polyphenol. suÊt thu håi, viÖc dïng hçn hîp ethanol: Tuy nhiªn khi nhiÖt ®é t¨ng lªn, ph¶n øng n−íc cho kÕt qu¶ nhá h¬n so víi viÖc dïng oxi hãa polyphenol bëi kh«ng khÝ t¨ng lªn do methanol nh−ng xÐt vÒ mÆt an toμn, ethanol ®ã l−îng polyphenol thu ®−îc gi¶m. Mμu cña an toμn h¬n cho ng−êi sö dông. Víi môc ®Ých dÞch chiÕt ë 600C cã mμu sÉm nhÊt cho thÊy s¶n xuÊt dÞch chiÕt polyphenol tõ vá v¶i øng ë nhiÖt ®é nμy ph¶n øng oxi hãa polyphenol dông trong c«ng nghiÖp thùc phÈm vμ c«ng vá v¶i x¶y ra m¹nh nhÊt. nghiÖp d−îc, hçn hîp ethanol: n−íc ®−îc KÕt qu¶ ¶nh h−ëng cña nhiÖt ®é ®Õn chän ®Ó chiÕt polyphenol tõ vá v¶i vμ ®−îc hiÖu suÊt chiÕt polyphenol vá v¶i thu ®−îc dïng trong thÝ nghiÖm m« h×nh hãa. phï hîp víi c«ng bè cña Todaro vμ cs. (2009): nhiÖt ®é ¶nh h−ëng rÊt râ rÖt ®Õn hiÖu qu¶ 3.2.2. ¶nh h−ëng cña nhiÖt ®é chiÕt anthocyanin tõ vá qu¶ cμ tÝm; khi nhiÖt NhiÖt ®é lμ yÕu tè quan träng ¶nh h−ëng ®é t¨ng tõ 0 ®Õn 400C, hiÖu qu¶ chiÕt t¨ng kh«ng nh÷ng tíi hiÖu suÊt trÝch ly mμ cßn ¶nh nh−ng khi nhiÖt ®é t¨ng trªn 400C, l−îng h−ëng tíi chi phÝ vμ chÊt l−îng cña dÞch chiÕt anthocyanin thu ®−îc gi¶m. Ruenroengklin polyphenol. NhiÖt ®é lμm gi¶m ®é nhít trong vμ cs. (2008) khi nghiªn cøu ¶nh h−ëng cña dung dÞch, t¨ng tèc ®é thÈm thÊu dung m«i nhiÖt ®é ®Õn qu¸ tr×nh chiÕt polyphenol vá vμo tÕ bμo vμ t¨ng hiÖu suÊt trÝch ly. Tuy v¶i cho thÊy khi nhiÖt ®é t¨ng tõ 400C ®Õn nhiªn, tiÕn hμnh chiÕt ë nhiÖt ®é qu¸ cao th× 600C, hiÖu qu¶ chiÕt polyphenol t¨ng nh−ng võa tèn chi phÝ æn nhiÖt võa t¨ng nguy c¬ gi¶m sau ®ã hiÖu qu¶ chiÕt polyphenol kh«ng t¨ng chÊt l−îng dÞch chiÕt do ph¶n øng n©u hãa. khi t¨ng nhiÖt ®é tõ 600C ®Õn 700C. 998
6. Mô hình hóa quá trình chiết polyphenol từ vỏ vải B¶ng 3. ¶nh h−ëng cña thêi gian ®Õn hiÖu suÊt chiÕt polyphenol tõ vá v¶i Thời gian (phút) Polyphenol tổng số (mgGAE/g CK) Hiệu suất thu hồi polyphenol (%) 60 59,01a 61,31a 90 55,47a 57,63a 120 58,08a 60,34a 150 58,27a 60,54a 180 61,68a 64,09a Các số với các chữ khác nhau thì khác nhau ở mức ý nghĩa 0,05. *: Hiệu suất thu hồi = Polyphenol tổng số thu được (mgGAE/g CK)/Polyphenol tổng số của vỏ vải (mgGAE/g CK)*100 3.2.3. ¶nh h−ëng cña thêi gian 3.3. M« h×nh hãa qu¸ tr×nh chiÕt polyphenol tõ vá v¶i Thêi gian chiÕt còng lμ mét trong nh÷ng TiÕn hμnh thÝ nghiÖm theo 3 yÕu tè ¶nh yÕu tè quan träng, ¶nh h−ëng ®Õn hiÖu suÊt, chÊt l−îng dÞch chiÕt polyphenol còng nh− h−ëng: X: Nång ®é ethanol (% v/v) tÝnh kinh tÕ cña qu¸ tr×nh. NÕu thêi gian qu¸ 1 X: NhiÖt ®é xö lý (oC) ng¾n, kh«ng ®ñ ®Ó dung m«i x©m nhËp vμo 2 X: pH dung dÞch chiÕt trong tÕ bμo, hßa tan polyphenol vμ chiÕt rót 3 ra ngoμi Ýt th× l−îng polyphenol thu ®−îc sÏ Hμm môc tiªu lμ Y: Hμm l−îng polyphenol thÊp, ng−îc l¹i thêi gian chiÕt qu¸ dμi lμm thu ®−îc tõ 1 g chÊt kh« vá v¶i (g GAE/g DW). gi¶m hiÖu suÊt sö dông thiÕt bÞ vμ polyphenol D¹ng m« h×nh: cã thÓ bÞ oxi hãa. TiÕn hμnh chiÕt polyphenol Y = b0 + b1X1 + b2X2 + b3X3 + b12X1X2 + tõ vá v¶i trong c¸c kho¶ng thêi gian kh¸c b13X1X3 + b23X2X3 nhau, kÕt qu¶ cho ë b¶ng 3. Sè liÖu ®−îc xö lý C¸c møc thÝ nghiÖm giíi thiÖu ë b¶ng 4. kÕt qu¶ b»ng phÇn mÒm SAS9.0 cho thÊy thêi Víi c¸c møc thÝ nghiÖm nh− trªn, b¶ng gian chiÕt thay ®æi tõ 60 ®Õn 120 phót kh«ng ma trËn thùc nghiÖm (B¶ng 5) ®−îc x©y cã ¶nh h−ëng tíi qu¸ tr×nh t¸ch chiÕt dùng. Mçi thÝ nghiÖm ®−îc lÆp l¹i 3 lÇn, kÕt polyphenol tõ vá v¶i ë møc ý nghÜa = 0,05. qu¶ cho ë b¶ng 6. §iÒu ®ã cho thÊy ®èi víi vá v¶i, thêi gian 60 Trong ®ã: c¸c biÕn XS lμ c¸c biÕn chuÈn. phót ®ñ ®Ó t¸ch chiÕt polyphenol trong c¸c 1 C«ng thøc chuyÓn c¸c biÕn thùc thμnh biÕn ®iÒu kiÖn ®· ®−îc x¸c ®Þnh. chuÈn nh− sau: XS = 2 * (X - møc gèc) / (møc XÐt s¬ bé ¶nh h−ëng cña mét sè yÕu tè i i trªn - møc d−íi). ®Õn hiÖu suÊt thu håi polyphenol tõ vá v¶i ta Ma trËn kÕt qu¶ ®−îc ®−a vμo phÇn thÊy, thêi gian 60 phót ®ñ ®Ó chiÕt polyphenol mÒm Nemrowd ®Ó x¸c ®Þnh m« h×nh. KÕt qu¶ tõ vá v¶i. NhiÖt ®é trong kho¶ng 400C - 600C ®−îc chØ ra ë b¶ng c¸c hÖ sè cña m« h×nh ¶nh h−ëng ®Õn hiÖu suÊt chiÕt. Thªm vμo ®ã, (B¶ng 7). vá v¶i cßn chøa nhiÒu anthocyanin, c¸c hîp chÊt nμy bÒn ë pH acid, nhiÒu kÕt qu¶ chØ ra VËy m« h×nh miªu t¶ ¶nh h−ëng cña c¸c r»ng pH cã ¶nh h−ëng ®Õn hiÖu qu¶ chiÕt yÕu tè nång ®é ethanol, nhiÖt ®é vμ pH ®Õn polyphenol tõ vá v¶i (Ruenroengklin vμ cs., hiÖu suÊt chiÕt polyphenol vá v¶i nh− sau: 2008; Zhong vμ cs., 2007). XuÊt ph¸t tõ c¸c Y= 62745,17 + 3946,87XS1 + 6643,00XS2 kÕt qu¶ nghiªn cøu s¬ bé vμ tμi liÖu tham – 9949,96XS3 – 1392,63XS1XS2 + kh¶o vÒ c¸c yÕu tè ¶nh h−ëng ®Õn hiÖu suÊt 2718,14XS1XS3 + 9880,41XS2XS3 chiÕt polyphenol tõ vá v¶i, nghiªn cøu nμy Trong ®ã: ®· tiÕn hμnh m« h×nh hãa qu¸ tr×nh chiÕt C¸c biÕn XSi lμ c¸c biÕn chuÈn. polyphenol tõ vá v¶i víi c¸c yÕu tè: nång ®é R2 = 0,934 cho thÊy m« h×nh ph¶n ¸nh ethanol, nhiÖt ®é chiÕt vμ pH cña dÞch chiÕt. 93,4% thùc tÕ. 999
7. Lại Thị Ngọc Hà, Nguyễn Thị Thu Hương, Phan Thị Hằng B¶ng 4. C¸c møc thÝ nghiÖm o Mức thí nghiệm X1 – Nồng độ ethanol (%v/v) X2 – Nhiệt độ ( C) X3 - pH Mức gốc 50 50 4 Khoảng biến đổi 10 10 2 Mức trên 60 60 6 Mức dưới 40 40 2 B¶ng 5. Ma trËn thùc nghiÖm Biến chuẩn Biến thực Số S S S X - Nồng độ ethanol X - Nhiệt độ thí nghiệm X X X 1 2 X - pH 1 2 3 (%v/v) (°C) 3 1 -1 -1 -1 40 40 2 2 +1 -1 -1 60 40 2 3 -1 +1 -1 40 60 2 4 +1 +1 -1 60 60 2 5 -1 -1 +1 40 40 6 6 +1 -1 +1 60 40 6 7 -1 +1 +1 40 60 6 8 +1 +1 +1 60 60 6 B¶ng 6. Ma trËn kÕt qu¶ Nồng độ ethanol Nhiệt độ Polyphenol tổng số Thí nghiệm pH (% v/v) (°C) (µg GAE/g CK) 1 40 40 2 77941,56 2 40 40 2 74894,70 3 40 40 2 78151,81 4 60 40 2 72679,79 5 60 40 2 76905,21 6 60 40 2 75022,19 7 40 60 2 63576,69 8 40 60 2 66131,90 9 40 60 2 68101,80 10 60 60 2 69069,67 11 60 60 2 79047,51 12 60 60 2 70818,77 13 40 40 6 25319,42 14 40 40 6 24709,25 15 40 40 6 23559,31 16 60 40 6 45261,42 17 60 40 6 47844,26 18 60 40 6 50937,12 19 40 60 6 70599,25 20 40 60 6 66635,34 21 40 60 6 65958,65 22 60 60 6 73611,97 23 60 60 6 68190,26 24 60 60 6 70916,31 1000
8. Mô hình hóa quá trình chiết polyphenol từ vỏ vải B¶ng 7. C¸c hÖ sè cña m« h×nh Độ lệch chuẩn của hàm mục tiêu 2825,037 R2 0,934 Bậc tự do 16 Hệ số Giá trị F Độ lệch chuẩn t Mức ý nghĩa % b0 62745,174 1,00 576,658 108,81 < 0,01 b1 3946,867 1,00 576,658 6,84 < 0,01 b2 6643,004 1,00 576,658 11,52 < 0,01 b3 -9949,960 1,00 576,658 -17,25 < 0,01 b12 -1392,628 1,00 576,658 -2,41 2,69 * b13 2718,143 1,00 576,658 4,71 0,0269 b23 9880,412 1,00 576,658 17,13 < 0,01 *: Ý nghĩa 0,05; : ý nghĩa 0,001 B¶ng 8. So s¸nh gi¸ trÞ thùc tÕ vμ gi¸ trÞ tÝnh to¸n tõ m« h×nh Polyphenol tổng số (µg Biến thực Biến chuẩn GAE/g CK) Thí Sai Nồng độ nghiệm Nhiệt độ khác* ethanol pH XS XS XS Tính toán Thực tế (°C) 1 2 3 (% v/v) 1 52 53 3,5 0,2 0,3 -0,25 67054,44 71235,82 94,13 2 54 56 3 0,4 0,6 -0,5 69442,72 75948,58 91,43 3 56 59 2,5 0,6 0,9 -0,9 69910,00 79750,35 87,66 4 58 62 2 0,8 1,2 -1 68456,30 67727,99 101,08 *: Sai khác = Giá trị tính toán/Giá trị thực tế*100 B¶ng 7 cho thÊy c¸c yÕu tè nång ®é ®éng cña enzyme polyphenol oxidase ethanol, nhiÖt ®é vμ pH ®Òu ¶nh h−ëng ®Õn (Ruenroengklin vμ cs., 2008). Nång ®é ethanol hμm môc tiªu ë møc ý nghÜa = 0,001 trong t¨ng lμm t¨ng hiÖu suÊt thu polyphenol cã lÏ ®ã pH lμ yÕu tè ¶nh h−ëng m¹nh nhÊt råi tíi ®−îc quyÕt ®Þnh bëi tû lÖ c¸c hîp chÊt phenol nhiÖt ®é vμ nång ®é ethanol. Tuy nhiªn, −a n−íc vμ kþ n−íc cña vá v¶i. chiÒu h−íng ¶nh h−ëng cña c¸c yÕu tè nμy Sù t−¬ng t¸c gi÷a hai yÕu tè trong c¸c ®Õn hμm môc tiªu th× kh¸c nhau: trong giíi yÕu tè nghiªn cøu ®Òu ¶nh h−ëng cã ý nghÜa h¹n nghiªn cøu, nång ®é ethanol vμ nhiÖt ®é ®Õn hμm môc tiªu, ®Æc biÖt sù t−¬ng t¸c gi÷a ¶nh h−ëng d−¬ng ®Õn hμm môc tiªu cã nghÜa pH vμ nång ®é ethanol, sù t−¬ng t¸c gi÷a pH lμ khi t¨ng nång ®é ethanol hoÆc t¨ng nhiÖt vμ nhiÖt ®é ®Òu ¶nh h−ëng ®Õn hμm môc ®é chiÕt, l−îng polyphenol thu ®−îc t¨ng; pH tiªu víi møc ý nghÜa 0,001. T−¬ng t¸c gi÷a ¶nh h−ëng ©m ®Õn hμm môc tiªu, khi pH nhiÖt ®é vμ pH ¶nh h−ëng m¹nh nhÊt ®Õn gi¶m, l−îng polyphenol thu ®−îc t¨ng. Khi hμm môc tiªu. nhiÖt ®é t¨ng, ®é nhít cña dung dÞch gi¶m, kh¶ n¨ng thÈm thÊu cña dung m«i vμo tÕ 3.4. KiÓm tra m« h×nh bμo vμ chiÕt polyphenol ra khái tÕ bμo t¨ng. TiÕn hμnh thÝ nghiÖm kiÓm tra tÝnh pH thÊp mét mÆt gióp lμm bÒn c¸c hîp chÊt ®óng ®¾n cña m« h×nh ë c¸c ®iÒu kiÖn trong anthocyanin, mÆt kh¸c k×m h·m sù ho¹t kho¶ng nghiªn cøu cña c¸c yÕu tè (B¶ng 8). 1001
9. Lại Thị Ngọc Hà, Nguyễn Thị Thu Hương, Phan Thị Hằng KÕt qu¶ cho thÊy gi¸ trÞ tÝnh to¸n biÕn Duan X., Y. Jiang, X. Su, Z. Zhang, J. Shi (2007). ®æi 87% ®Õn 101% so víi gi¸ trÞ thu ®−îc Antioxidant properties of anthocyanins trªn thùc tÕ. §iÒu nμy phï hîp víi gi¸ trÞ R2 extracted from litchi (Litchi chinenesis Sonn.) thu ®−îc cña m« h×nh. fruit pericarp tissues in relation to their role in the pericarp browning. Food 4. KÕT LUËN Chemistry, 101, p. 1365–1371. Edeas M. (2006). Les antioxydants dans la Vá v¶i cã hμm l−îng polyphenol cao tourmente. Newsletter de SociÐtÐ (9,625% chÊt kh«). §©y lμ nguån nguyªn liÖu française des antioxydants, 9, p. 1-2. dåi dμo cho s¶n xuÊt dÞch chiÕt polyphenol Hung H. C., K. J. Joshipura, R. Jiang, F. B. øng dông trong d−îc phÈm vμ c«ng nghiÖp Hu, D. Hunter, S. A. Smith Warner thùc phÈm. (2004). Fruit and vegetable intake and C¸c yÕu tè nhiÖt ®é, nång ®é ethanol vμ risk of major chronic disease. Journal of pH ¶nh h−ëng ®Õn hiÖu qu¶ t¸ch chiÕt National Cancer Institute, 96 (21), p. 1577 polyphenol tõ vá v¶i. M« h×nh m« t¶ qu¸ – 1584. tr×nh t¸ch chiÕt theo c¸c yÕu tè trªn nh− sau: Haliwell B. (1994). Free radicals, Y = 62745,17 + 3946,87XS + 1 antioxidants and human disease: 6643,00XS – 9949,96XS – 2 3 curiority, cause or consequence. The 1392,63XS XS + 2718,14XS XS 1 2 1 3 Lancet, 344, p. 721-724. + 9880,41XS XS . 2 3 Hu Z.Q., X.M. Huang, H.B. Chen, H.C. M« h×nh nμy cã thÓ sö dông ®−îc ®Ó tiÕn Wang (2010). Antioxidant capacity and hμnh tèi −u hãa ®iÒu kiÖn t¸ch chiÕt phenolic compounds in litchi (Litchi polyphenol tõ vá v¶i. chinensis Sonn.) pericarp.III International Symposium on Longan, Lychee, and other TμI LIÖU THAM KH¶O Fruit Trees in Sapindaceae Family, Alberto M. R., M. A. R. Canavosio, M. C. Manca de Nadra (2006). Antimicrobial .htm, cited 25/6/2010. effect of polyphenols from apple skins on Pincemail J. and J. O. Defraigne (2004). Les human bacterial. Electronic Journal of antioxydants: une vaste rÐseau de Biotechnology ISSN: 0717-3458., 9 (3), dÐfenses pour lutter contre l’oxygÌne Special Issue. toxique. Symponium annuel nutritionel, AOAC Method 2005.02, 37.1.68. Institut DANON, p. 13-26. Pompeu D. R., E. M. Silva, H. Rogez (2009). cited 18/6/2009. Optimisation of the solvent extraction of Chirinos R., H. Rogez, D. Campos, R. phenolic antioxidants from fruits of Pedreschi, Y. Larondelle (2007). Euterpe oleracea using Response Surface Optimization of extraction conditions of Methodology. Bioresource Technology, antioxidant phenolic compounds from 100, p. 6076-6082. mashua (Tropaeolum tuberosum Ruiz & Ruenroengklin N., J. Zhong, X. Duan, B. Pavon) tubers. Separation and Yang, J. Li and Y. Jiang (2008). Effects of Purifiaction Technology, 55, p. 217-225. Various Temperatures and pH Values on Chun Yi, J. Shi, J. Kramer, S. Xue, Y. Jiang, the Extraction Yield of Phenolics from M. Zhang, Y. Ma, J. Pohorly (2009). Fatty Litchi Fruit Pericarp Tissue and the acid composition and phenolic antioxidant Antioxidant Activity of the Extracted of winemaking pomace powder. Food Anthocyanins. Int. J. Mol. Sci., 9, p. Chemistry, 114, p. 570-576. 1333-1341. 1002
10. Mô hình hóa quá trình chiết polyphenol từ vỏ vải Silva E. M., H. Rogez, Y. Larondelle (2007). in vitro assays. Food Chemistry, 106, p. Optimisation of extraction of phenolic 331-339. from Inga edulis leaves using response Tapiero H., K. D. Tew, Nguen Ba G. and G. surface methodology. Separation and MathÐ (2002). Polyphenols: Do they play a Purification Technology, 55, p. 381-387. role in the prevention of human Singleton, V. L. and L. A. Rossi (1965). pathologies? Editions scientifiques et Colorimetry of total phenolics and mÐdicales Elsevier SAS, 56, p. 200-207. phosphomolypdic-phosphotungstic acid Tabart J., C. Kevers, J. Pincemail, J.-O. reagents. American journal of Enology Defraigne, J. Dommes (2009). and Viticulture, 16, p. 144-158. Comparative antioxidant capacities of Sudha M.L., V. Baskaran and K. Leelavathi phenolic compounds measured by various (2007). Apple pomace as a source of tests. Food Chemistry, 113, p. 1226-1233. dietary fiber and polyphenols and its Todaro A., F. Cimino, P. Rapisarda, A. E. effect on the rheological characteristics Catalano, R. N. Barbagallo, G. Spagna and cake making. Food Chemistry, 104 (2009). Recovery of anthocyanins from (2), p. 686-692. eggplant peel. Food Chemistry, 114, p. 434-439. Shabtay A., H. Eitam, Y. Tadmor, A. Orlov, Wang X., Y. Wei, S. Yuan, G. Liu, Y. L. J. A. Meir, P. Weinberg, Z. G. Weinberg, Y. Zhang, W. Wang (2006). Potential Chen, A. Brosh, I. Izhaki, Z. Kerem anticancer activity of litchi fruit pericarp (2008). Nutritive and Antioxidative against hepatocallular carcinoma in vitro Potential of Fresh and Stored and in vivo. Cancer Letters 239, p. 144-150. Pomegranate Industrial Byproduct as a Zhong J., X.W. Duan, H.X. Qu, B. Yang, Y.L. Novel Beef Cattle Feed. J. Agric. Food Chen, N. Ruenroengklin, Y.M. Jiang Chem., 56, p. 10063–10070. (2007). Effects of various extraction Souza J. N. S., E. M. Silva, A. Loir, J-F. conditions on phenolic contents and their Rees, H. Rogez, Y. Larondelle (2008). antioxidant activities of litchi fruit Antioxidant capacity of four polyphenol- pericarp. Europe-Asia Symposium on rich Amazonian plant extracts: A Quality Management in Postharvest correlation study using chemical and biological Systems - Eurasia 2007. 1003